電泳槽 電泳槽是電泳系統(tǒng)的核心部分,根據(jù)電泳的原理,電泳支持物都是放在兩個(gè)緩沖液之間,電場通過電泳支持物連接兩個(gè)緩沖液,不同電泳采用不同的電泳槽.常用的電泳槽有: (1)圓盤電泳槽:有上,下兩個(gè)電泳槽和帶有鉑金電極的蓋。上槽中具有若干孔,孔不用時(shí),用硅橡皮塞塞住.要用的孔配以可插電泳管(玻璃管)的硅橡皮塞。電泳管的內(nèi)徑早期為5~7mm,為保證冷卻和微量化,現(xiàn)在則越來越細(xì). (2)垂直板電泳槽:垂直板電泳槽的基本原理和結(jié)構(gòu)與圓盤電泳槽基本相同。差別只在于制膠和電泳不在電泳管中,而是在塊垂直放置的平行玻璃板中間. (3)水平電泳槽:水平電泳槽的形狀各異,但結(jié)構(gòu)大致相同。一般包括電泳槽基座,冷卻板和電極.
聚丙烯酰胺凝膠電泳可用做蛋白質(zhì)純度的鑒定.聚丙烯酰胺凝膠電泳同時(shí)具有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng),可以將分子大小相同而帶不同數(shù)量電荷的物質(zhì)分離開,并且還可以將帶相同數(shù)量電荷而分子大小不同的物質(zhì)分離開。其分辨率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一般層析方法和電泳方法,可以檢出10-9~10-12g的樣品,且重復(fù)性好,沒有電滲作用.
聚丙烯酰胺凝膠電泳可用于蛋白質(zhì)定量。電泳后的凝膠經(jīng)凝膠掃描儀掃描,從而給出定量的結(jié)果.凝膠掃描儀主要用于對樣品單向電泳后的區(qū)帶和雙向電泳后的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描。 瓊脂或瓊脂糖凝膠免疫電泳可用于①檢查蛋白質(zhì)制劑的純度;②分析蛋白質(zhì)混合物的組分;③研究抗血清制劑中是否具有抗某種已知抗原的抗體;④檢驗(yàn)兩種抗原是否相同.
選擇合適的凝膠濃度,使組分得以充分的分離。通??拷把氐牡鞍讕Х直媛什患?,所以應(yīng)根據(jù)分子量與凝膠孔徑的關(guān)系,灌制足夠長度的凝膠,以使樣品不會走出前沿。樣品的蛋白水解作用也引起擴(kuò)散而使分辨率降低。水解作用通常發(fā)生在樣品準(zhǔn)備的時(shí)候,系統(tǒng)中的內(nèi)源性蛋白酶會水解樣品蛋白,如果在緩沖液中加蛋白酶抑制劑可以減少這種情況的發(fā)生。